О пасеке

Пчеловодство, разведение и содержание пчел. Пчелы и здоровье. Огород, сад, дача.

Окт, 2012
28

К диагностике американского и европейского гнильцов

Опубликовал: Petr_MS



Клинические признаки, наблюдаемые при заболевании расплода американским и европейским гнильцами: пестрый расплод, изменение цвета личинки, ее разложение с последующим образованием сухой корочки — имеют место с небольшими вариациями и при гибели личинок, вызванной грибами (аспергиллез) и вирусами (мешотчатый расплод), а также при застуженном расплоде, что затрудняет постановку диагноза. Обсуждаемая в последнее время якобы беспричинная гибель пчелиных семей и слеты (коллапс) могут иметь весьма конкретную причину. К сожалению, квалифицированного лабораторного исследования по выяснению причин гибели расплода в последние годы в большинстве регионов РФ не проводится.

Возбудитель американского гнильца — спорообразующая бактерия Penibacillus larvae. В вегетативной форме она представляет нитевидные палочки со жгутиками длиной 2,5-5 мкм. Споры — крупные, 1,0-1,9 мкм. В процессе спорообразования жгутики группируются в косички, которые видны под микроскопом. В одной погибшей личинке за короткое время накапливается более миллиарда спор, которые устойчивы к высокой температуре и химическим средствам. Во внешней среде (пустых ульях) споры сохраняются десятки лет. Заражение личинок происходит только спорами.

Болезнь характеризуется массовой гибелью запечатанного расплода, достигающей 30%. Ячейки сота заполнены тянущейся слизистой массой коричневого цвета с запахом столярного клея. При высыхании, которое наступает примерно через 30 дней, образуются темно-коричневые или черные корочки, трудно извлекаемые из ячейки. Крышечки ячеек западают и продырявливаются. В соте встречаются пустые ячейки, что придает ему пестрый вид. Если личинка гибнет в стадии куколки, то характерным признаком болезни является наличие «язычка», выступающего из головки. Продуктивность пчелиных семей снижается до 40-70%. В Центральном регионе России болезнь клинически проявляется в июне-июле, в южных — в мае-июне.

Первые случаи заболевания пчел на пасеке должны быть подтверждены заключением официальной ветеринарной лаборатории и зарегистрированы. Болезнь представляет большую опасность для пчеловодства, и ее относят к карантинным. Заболевание распространено во всем мире.

В лабораторию направляют образец сота размером 10×15 см, содержащий максимальное количество погибшего расплода, упакованный в картонный или деревянный ящик. В лаборатории исследуют под микроскопом мазки, приготовленные из первичного материала и окрашенные различными методами; изолируют возбудителя на питательной среде и определяют его культурально-биохимические свойства.


Мазки готовят из водной суспензии ткани личинок и окрашивают по Граму с целью определения морфологии вегетативной формы возбудителя, которые окрашиваются грамположительно. Споры окрашивают 2%-ным спиртовым раствором карболового фуксина. Споры P. larvae обладают броуновским движением, которое можно обнаружить по методу модифицированной висячей капли. С этой целью мазок окрашивают карболовым фуксином в течение 30 с, споласкивают водой, и пока он еще влажный, покрывают тонким слоем иммерсионного масла. Избыток жидкости удаляют и просматривают под микроскопом. В поле зрения микроскопа в каплях воды, заключенных в масло, наблюдают движение спор. Этот признак считается специфическим для спор американского гнильца.

Если инфекция развивается в личинке менее 10 дней, в мазках обнаруживают длинные вегетативные формы бактерии, споры.

Для культивирования возбудителя чаще всего используют среду Бейли, которая может быть твердой (2% агара) или полужидкой (0,3%). Рекомендуется также мясопептонный сывороточный агар (10% лошадиной сыворотки). Суспензию, приготовленную из ткани личинок, прогревают при 80°С в течение 10-15 мин для инактивирования вегетативных форм бактерий и высевают на питательную среду в чашках Петри, используя стерильный ватный тампон или пастеровскую пипетку. Посевы инкубируют в течение 2-4 суток при 34°С. Возбудитель растет в виде отдельных небольших непрозрачных колоний или сплошного налета. P. larvae не образует каталазу, не обладает гемолитической активностью, восстанавливает нитриты, свертывает молоко, расщепляет глюкозу с образованием кислоты.

В меде споры находятся в незначительном количестве и поэтому их предварительно концентрируют, используя диализные трубки.

Возбудитель европейского гнильца Mellissococcus plutonius — неспорообразующая неподвижная бактерия, имеющая форму клиновидного кокка, в мазках располагается одиночно, цепочкой или в виде розеток. Величина кокка — 0,5-1,0 мкм, образует капсулу, которая окружает несколько бактерий. Нативные мазки готовят из водной суспензии ткани личинки или, что лучше, из содержимого средней кишки.

Наиболее распространенный метод окраски мазков — негативный (5%-ный водный раствор нигрозина), при котором хорошо выявляется ланцетовидная форма бактерии. Возможна окраска мазков по Граму и карболовым фуксином. Для культивирования применяется среда Бейли — плотная или полужидкая. Лучший материал для изоляции возбудителя — свежепогибшие личинки. Водную суспензию ткани личинки (1:10) или содержимое средней кишки высевают на питательную среду. Первичные посевы культивируют в атмосфере, содержащей 10% углекислого газа, при температуре 34°С. На плотном агаре возбудитель растет в виде небольших (1,0-1,5 мм) белых или матовых колоний в течение 4-5 суток. Сохраняют культуру на косом агаре, в пробирках под резиновыми пробками в течение нескольких месяцев или в лиофилизированном состоянии.

Кроме М. plutonius из патологического материала может быть выделена вторичная микрофлора — Enterococcus faecalis, а также Paenibacillus alvei. Европейский гнилец — болезнь 3-4-дневных личинок открытого расплода, редко в запущенных случаях поражается печатный расплод. Относится к карантинным болезням. Она чаще возникает и проявляется в мае—июне в Центральном регионе России. В пораженных семьях пчел расплод пестрый, в различных местах сота беспорядочно расположены открытые ячейки с яйцами, разновозрастными личинками, печатный расплод с продырявленными крышечками и пустые ячейки после удаления из них пчелами погибших личинок. Заболевшие личинки вытягиваются вдоль стенки, поднимаются к отверстию или погибают на дне с загибающимися вверх или вниз концами тела, иногда свертываются в штопор. Тело личинки становится тусклым, желтоватым или серо-белым, отечным, дряблым, сегментация сглаживается. Кожица личинки прозрачная, сквозь нее видны белый (в норме желтый) кишечник и трахеи. В последующем погибшая личинка оседает на дно ячейки, становится влажной, плоской, легко рвется при извлечении, превращается в тестообразную желто-коричневую массу, вытягивающуюся в толстые, короткие, легко рвущиеся нити или представляет водянистую желтоватую жидкость, вытекающую при наклоне сота. Высохшие личинки в виде темных легкоудаляемых корочек располагаются на дне ячеек. Пораженные личинки могут погибать в первые 1-2 дня после запечатывания расплода. Крышечки над таким расплодом темнеют, западают, иногда продырявливаются. В ячейках содержится темно-коричневая гнилостная масса с неприятным запахом. Семья пчел постепенно слабеет и погибает.

Европейский гнилец, вызываемый М. plutonius, следует отличать от других болезней со сходными клиническими признаками. Аналогичные изменения в открытом расплоде можно видеть при поражении его Вас. laterosporus, при парагнильце и других формах атипичного гнильца бактериального происхождения. На первой стадии заболевания личинок изменения их положения в ячейке, формы и цвета подобны при застуженном расплоде, мешотчатом расплоде, американском гнильце, аскосферозе, аспергиллезе. При всех поражениях стадии развития пчелы заразного и незаразного происхождения наблюдают пестрый расплод на соте, взрослые пчелы распознают и удаляют заболевших и погибших личинок раньше (на 1-2 сут), чем их может заметить пчеловод.

Описанная диагностика, рекомендуемая в настоящее время, трудоемка и предполагает выделение чистой культуры возбудителя. В результате истинная причина гибели расплода во многих случаях остается невыясненной.

В последние годы фирма VITA (Великобритания) предложила серологическую тест-систему Vita-Test, которую можно использовать на пасеке для постановки предварительного диагноза в течение 20-30 мин на американский и европейский гнильцы соответственно. Тест основан на иммунологической реакции возбудителя с антителом, сорбированным на бумаге. Наборы содержат пластмассовую пластинку с индикатором, двумя окнами, пластмассовую палочку, пипетку и буферный раствор. Непосредственно на пасеке или в лаборатории взятую из сота заболевшую личинку помещают во флакон с бусами, энергично встряхивают в течение 20 с и с помощью пипетки выдавливают в окно 3 капли суспензии. При наличии возбудителя в личинке в смотровом окне появляется синяя полоса через 1-3 мин в сравнении с рядом расположенной контрольной полосой.

Фирма любезно предоставила нам такие наборы, за что выражаем глубокую благодарность. Эти наборы мы использовали на суспензиях здоровых личинок и недавно зараженных европейским и американским гнильцами, аскосферозом. Материал поступил в лабораторию из различных регионов РФ. Наличие возбудителя М. plutonius подтверждено традиционным методом микроскопией мазков и культурально. Использовали параллельно два набора. Во всех случаях на наборе ЕРВ Тез1 получены положительные результаты с недавно зараженными личинками, из которых выделен М. plutonius. Отрицательный результат получен на здоровых личинках, а также на личинках, пораженных аскосферозом, и при испытании набора для выявления американского гнильца. Опыты показали высокую специфичность результатов набора EFA- и AFB-test.

Набор рекомендуется для использования специалистами при проверке пасек. Простота работы с ними и сравнительно невысокая стоимость позволяют пчеловодам применить их непосредственно на пасеке. Предварительная проверка патологического материала, высылаемого в лабораторию, позволяют в сопроводительной записке точно указать предмет исследования, сократить время поиска различных патогенов и соответственно уменьшить затраты на диагноз.

Испытание наборов в Великобритании показало их специфичность на уровне 98,6% (К.Wait et al., 2003). Высокая оценка их специфичности дана и в других странах (G.Chioveanu, M.Predoiu, 2007).

В настоящее время использование наборов рекомендовано Международным эпизоотическим бюро для диагностики американского и европейского гнильцов.

М.А.ЛУЧКО
ГНУ «Всероссийский институт
экспериментальной ветеринарии
им. Я.Р.Коваленко»
ж-л «Пчеловодство» №8, 2012 г.





Организация и оборудование любительской пасеки
Ваше имя: *
Ваш e-mail: *

Понравилась статья? Расскажите друзьям:

Общайтесь со мной:

Google Bookmarks Digg Reddit del.icio.us Ma.gnolia Technorati Slashdot Yahoo My Web News2.ru БобрДобр.ru RUmarkz Ваау! Memori.ru rucity.com МоёМесто.ru Mister Wong

Хотите получать новые статьи на почту? Введите свой Email

 

 

«С этой статьей также смотрят:»

Ваш отзыв


    Обо мне

    E-mail: petr9921()yandex.ru

    Skype: Petr_MS

    HitMeter - счетчик посетителей сайта, бесплатная статистика