Диагностика вирусных болезней пчел — простой метод

Опубликовал: Petr_MS

Диагностика вирусных болезней пчел

В настоящее время диагностические исследования на вирусные болезни пчел обычно проводят только в рамках научно-исследовательских работ. Разработанные методы диагностики требуют квалифицированного персонала и лабораторных условий. Пчеловодам практически негде получить услугу по таким диагностическим исследованиям, соответственно, во многих слу-чаях они не могут выяс-нить причину гибели пчел.

В России Федеральное государственное учреждение «Центр ветеринарии» проводит ежегодный анализ эпизоотической ситуации по заразным болезням животных, в том числе пчел. Данные для анализа поступают из субъектов России. Поскольку из-за отсутствия диагностикумов ветеринарные лаборатории не в состоянии провести иссле-дования на вирусные болезни, считается, что таких болезней в России нет.

Ненамного лучше обстоят дела с диагностикой бактериальных болезней пчел. Например, такая распространенная бактериальная болезнь пчелиного расплода, как европейский гнилец, в 2010 г. зарегистрирована лишь в восьми субъектах. По всей России официально выявлено всего 83 семьи пчел с европейским гнильцом!

Выход может быть найден в создании коммерческих тест-систем, позволяющих провести исследования не только квалифицированным персоналом в лаборатории, но и самим пчеловодом. В пасечных условиях возможно использование диагностических тестов на основе стандартной технологии иммунохроматографических тестов для диагностики вирусных и бактериальных болезней. Анализ при помощи такого теста занимает не более 30 мин. Число основных манипуляций — не более двух. Стабильность изделия при комнатной температуре — более года. Тесты для диагностики бактериальных болезней пчел (американского и европейского гнильцов) выпускает английская фирма Vita. Попытку создания таких тест-систем для выявления вирусов пчел предприняли J.R. Miranda, E.Forsgren, D.Graaf (2011), однако потерпели неудачу.

В России опытные образцы тест-систем для выявления вируса мешотчатого расплода и острого паралича пчел создали в ООО «Битест» при участии ВНИИ экспериментальной ветеринарии. Тест представляет из себя небольшую пластиковую кассету — чип с отверстием для внесения материала и шкалой из пористой мембраны (рис.).

При постановке диагноза извлекают больную личинку или куколку из сота, вносят во флакон с лизирующим буфером и шариками (входит в набор) и встряхивают. При встряхивании происходит измельчение и экстрагирование тканей личинки или куколки. Затем прилагаемой пипеткой полученный экстракт вносят через отверстие в чипе.

Благодаря действию капиллярных сил экстракт начинает двигаться вдоль пористой мембраны. Если в экстракте присутствует вирус, он будет связываться с антителами, иммобилизованными на мембране, на линии теста (напротив буквы Т). В результате появится полоска красного или фиолетового цвета, видимая невооруженным глазом. Контрольная линия, расположенная дальше (напротив буквы С), служит индикатором правильности постановки реакции. Положительным считается результат, когда образуются две полоски (на линии теста и на контрольной линии). При отрицательном результате появляется только одна контрольная полоска. Отсутствие полос свидетельствует о неправильно проведенных манипуляциях или непригодности теста (неправильное хранение или истечение срока годности).

Известно, что мешотчатый расплод имеет характерный клинический признак заболевания — гибель личинок после запечатывания. При аккуратном извлечении из ячейки сота погибших личинок их тело имеет вид мешочка, заполненного жидкостью. Личинки обычно не гниют и при длительном нахождении в ячейке высыхают до корочки, легко извлекаемой из ячейки. Однако в некоторых случаях после гибели личинки от вируса начинают размножаться гнилостные бактерии — утилизаторы мертвых тканей. Личинки не высыхают, а разлагаются, и клиническая картина сходна с американским или европейским гнильцом.

При остром параличе нет каких-либо специфических признаков заболевания. Погибают взрослые пчелы, куколки и личинки. В летний и осенний период взрослые больные пчелы обычно улетают и не возвращаются в улей, и лишь немногих из них можно найти ползающими по земле на территории пасеки. Иногда легче заметить гибель расплода от вируса острого паралича, чем гибель взрослых пчел. Обращает на себя внимание неправильное расположение тела открытых личинок, продырявленные ячейки запечатанных личинок и куколок. Однако неправильное расположение тела личинок можно наблюдать в начальной стадии аскосфероза (возбудитель патогенный гриб) и европейского гнильца (возбудитель бактерия), когда семья еще не ослабела и пчелы удаляют погибших личинок до того, как они проросли мицелием гриба или разложились под воздействием бактерий. Продырявленные крышечки над погибшими куколками и личинками также не являются признаком какой-то одной определенной болезни.

Таким образом, нельзя ориентироваться только на клинические признаки болезни. Ошибочный диагноз и неправильное лечение могут нанести дополнительный вред пчелам. При наличии набора тестов для определения основных возбудителей, вызывающих гибель расплода, можно быстро поставить диагноз на мешотчатый расплод, острый паралич, европейский гнилец, американский гнилец, а в будущем и на другие болезни и оперативно начать соответствующее лечение.

При испытании тестов мы использовали лабораторные штаммы вируса острого паралича №15 и мешотчатого расплода №6, выделенные соответственно в Московской и Калужской областях. Эти штаммы прошли несколько пассажей на пчелах и куколках пчел (заражение методом микроинъекции в лабораторных условиях). Диагностические сыворотки, полученные к этим штаммам, прошли тестирование в Англии и показали пригодность для выявления также и английских штаммов соответствующих вирусов.

Кроме того, при испытании тестов мы использовали образцы погибших куколок и личинок из различ-ных регионов России. В этих образцах ранее был установлен вирус мешотчатого расплода или вирус острого паралича методом РИД (реакция иммунодиффузии). Образцы получены из европейской части России (Архангельской, Оренбургской, Московской областей). Иммунохроматографические тесты сравнивали с реакцией иммунодиффузии, которую мы использовали на протяжении многих лет для диагнос-тики вирусных болезней пчел. Реакция иммунодиффузии позволяет выявить те или иные вирусы в больных или погибших пчелах, куколках или личинках, но для ее проведения требуются квалификация и лабораторные условия.

При испытаниях было установлено, что результаты иммунохроматографических тестов во всех случаях совпали с результатами реакции иммунодиффузии (табл.). Отсутствовала реакция на ткани здоровых личинок и куколок.

Результаты испытаний иммунохроматографических тестов

Таким образом, при использовании набора реагентов ООО «Битест» для выявления вирусов мешотчатого расплода и острого паралича не требуется какого-либо дополнительного лабораторного оборудования и квалифицированного персонала. Диагностическое исследование может быть проведено непосредственно на пасеке. Тест является быстрым и специфичным.

Ю.М.БАТУЕВ

ВНИИ экспериментальной ветеринарии
А.В.ТРОНИН, Л.В.КЕЛИН, Е.Г.ГАДЫЛЬШИНА
ООО «Битест»
ж-л «Пчеловодство» №5, 2013 г.

Литература

1. Аликин Ю.С., Афиногенов A3., Батуев Ю.М., Гробов О.Ф., Клименко В.П., Сенженко Л.П., Келин Л.В., Тронин А.В. Диагностика и профилактика вирусных болезней пчел // Пчеловодство. — 2011. — №5.

2. Miranda J.R., Forsgren E., Graaf D. Development of a lateral flow device for detecting six honeybee viruses: production and evaluation of the antisera // 42 International Apicultural Congress Apimondia, Buenos Aires, Argentina, 21-25 September. —2011.

Понравилась статья? Расскажите друзьям:

Общайтесь со мной:

Хотите получать новые статьи на почту? Введите свой Email