Кишечные ферменты пчел при варроатозе

Опубликовал: Petr_MS

Несмотря на значительное число работ, выполненных отечественными и зарубежными исследователями в области изучения варроатоза пчел, заболевание по-прежнему наносит большой ущерб пчеловодству. Одна из причин — недостаточная изученность вопросов, связанных с патогенным воздействием возбудителя на организм хозяина, с влиянием акарицидных обработок на клещей и организм медоносной пчелы. Цель наших исследований — изучение активности протеазы, липазы и каталазы у пчел, больных варроатозом, в зависимости от сезона года, степени поражения клещами и воздействия химическими препаратами.

Изучали активность протеазы и липазы средней кишки, активность каталазы задней кишки у однодневных пораженных (инвазированных) и непораженных (неинвазированных) насекомых в июне—сентябре. Для получения одновозрастных пчел соты с расплодом на выходе помещали в термостат при температуре 33...34°С и относительной влажности 75-80%. После выхода пчел из ячеек их распределяли по садкам (пораженных и неинвазированных раздельно).

Для определения активности протеазы у пчел отпрепарировали среднюю кишку, удалили содержимое, промыли водой и растерли в ступке до получения гомогенной массы, добавляя песок. В качестве экстрагента использовали дистиллированную воду в соотношении 1:10 (масса на объем). Через 30 мин экстракции при температуре 4...5°С пробы центрифугировали и затем отобрали надосадочную жидкость для исследования. В пять пробирок отмерили по 0,1 мл полученного экстракта, в другие пять — по 5 мл молочно-ацетатной смеси (РН=6,4), пробы поместили в водяную баню на 5 мин при 37°С. После этого молочно-ацетатную смесь налили в испытуемую жидкость и включили секундомер. Об окончании реакции судили по хлопьям, появившимся на стенках пробирки. Всего было исследовано 95 проб.

Активность липазы в средней кишке у насекомых определяли по методике Е.А.Васильевой [1]. Было проведено 90 исследований гомогената. Активность каталазы в задней кишке у пораженных и неинвазированных пчел определяли по методу Баха и Зубковой [2]. Проанализировано 80 проб.

Полученные результаты обрабатывали математически по методу Н.В.Садовского [3].

Влияние акарицидных обработок на активность исследуемых ферментов изучали у пчел в июле и сентябре. Для этого использовали однодневных неинвазированных насекомых из одного гнезда, которых рассаживали в сетчатые изоляторы. Изоляторы помещали в пчелиные семьи, которые обрабатывали однократно термическими аэрозолями бромпропилата и амитраза. Контрольных пчел подвергали обработке дымом без препаратов. До обработок и через 24 ч после них у пчел определяли активность ферментов вышеуказанными методами. Результаты математически обрабатывались по методу Н.В.Садовского [3].

Проведенные исследования показали, что при интенсивности инвазии от 100 до 113 эктопаразитов на 100 пчел, активность протеазы у больных и неинвазированных насекомых отличалась незначительно в июне-августе (табл. 1).

1. Активность протеазы у инвазированных и неинвазированных пчел (время створаживания молочно-ацетатной смеси, мин, М±m) 

Из данных таблицы 1 видно, что в сентябре у пораженных пчел активность протеазы была достоверно ниже, чем у неинвазированных. Между степенью поражения осенних пчел и активностью фермента установлена отрицательная корреляционная связь (r = -0,91). В период с июня по сентябрь у больных и свободных от клещей пчел отмечали достоверное повышение активности протеазы.

С июня по август при вышеуказанной интенсивности инвазии не наблюдали достоверных изменений в активности липазы у больных и неинвазированных насекомых. В сентябре при увеличении численности клещей до 151 эктопаразита на 100 насекомых у пораженных пчел активность липазы повысилась в 1,8 раза по сравнению с непораженными. Анализ сезонных изменений показал, что у инвазированных пчел с июня по сентябрь достоверно увеличивалась активность липазы.

Это явление связано с ростом интенсивности инвазии, на что указывает положительная корреляционная связь (r = 0,99) между данными показателями.

У неинвазированных пчел таких изменений не регистрировали (табл. 2).

2. Активность липазы у инвазированных и неинвазированных пчел (мл 0,02 н. раствора NaOH, пошедшего на титрование свободных жирных кислот в пересчете на 1 г гомогената, М±m)

месяц проведения опытов	Число клещей на 100 пчел	Пчелы		td
		инвазированные	неинвазированные
Июнь	100	72,5±9,2	98,2±8,5	<3,0
Июль	103	71,9±20,9	111,0±7,9	—
Август	113	82,0±10,4	111,0±9,7	—
Сентябрь	151	216,8±23,7	116,2±7,3	4,0

Анализ полученных данных показал, что в июне-августе по активности каталазы больные и непораженные насекомые не отличались друг от друга. Интенсивность инвазии в указанный период составляла 100-109 клещей на 100 пчел. У инвазированных пчел, вышедших из ячеек в сентябре, активность каталазы была выше в 2,9 раза по сравнению с неинвазированными. При этом на 100 пчелах регистрировали 150 эктопаразитов. Повышение активности каталазы у больных пчел в сентябре связано с резким увеличением интенсивности инвазии, на что указывает положительная корреляционная связь между показателями (r = 0,99). У насекомых обеих групп в период с июня по сентябрь наблюдали достоверное повышение активности фермента (у пораженных — в 9,1 раза, у неинвазированных — в 3,3 раза).

При изучении влияния химических акарицидов на активность вышеуказанных ферментов установлено, что у пчел, обработанных в июле термическим аэрозолем бромпропилата, снижается активность каталазы и протеазы в 1,9 и 2,0 раза соответственно по сравнению с контролем.

У пчел, подвергнутых лечению амитразом, достоверных изменений в активности исследуемых ферментов не регистрировали.

У осенних пчел после применения бромпропилата и амитраза достоверных изменений в активности протеазы, липазы и каталазы по сравнению с контролем не отмечено.

Таким образом, в результате проведенных исследований установлена достоверная корреляционная связь между степенью поражения медоносных пчел возбудителем варроатоза и активностью кишечных ферментов полезных насекомых (протеазы, липазы и каталазы).

У пчел осенней генерации в отличие от летней активность кишечных ферментов не изменяется под воздействием термических аэрозолей амитраза и бромпропилата. Полученные нами данные могут быть учтены при разработке регламентов применения химических акарицидов для снижения численности клещей в семьях пчел.

Т.Ф.ДОМАЦКАЯ
ВНИИ ветеринарной энтомологии
и арахнологии Россельхозакадемии
ж-л «Пчеловодство» №2, 2013 г.

Литература

1. Васильева Е.А. Клиническая биохимия сельскохозяйственных животных. — М., 1975.

2. Дроздов Н.С., Матеранская Н.П. Определение активности каталазы крови по методу Баха и Зубковой // Практикум по биологической химии. — М., 1970.

3. Садовский Н.В. Константные методы математической обработки количественных показателей // Ветеринария. — 1975.—№11.

Варроатоз пчел

Понравилась статья? Расскажите друзьям:

Общайтесь со мной:

Хотите получать новые статьи на почту? Введите свой Email