14
Энтерофлора здоровых и больных пчел в период зимовки
Опубликовал: Petr_MSИзвестно, что нормальная микрофлора кишечника играет важную роль в поддержании гомеостаза организма хозяина при развитии различных заболеваний. Бактерии-симбионты способствуют созреванию иммунной системы, помогают утилизировать питательные вещества, поступающие в организм пчел, подавляют развитие посторонней микрофлоры, продуцируют биологически активные вещества (витамины, ферменты и т.д. ).
В регионах с холодным климатом пчелы проводят 5-6 месяцев в состоянии зимовки. Основной корм пчел в зимний период — мед или сахароза, от качества и полноты утилизации которых зависит жизнеспособность семьи. Среди микроорганизмов, активно утилизирующих углеводы, энтеробактерии занимают важное место. Так, бактерии рода Klebsiella сбраживают глюкозу, сахарозу, мальтозу, арабинозу и другие углеводы [1].
Можно предположить, что нормальная кишечная микрофлора пчел определяет состояние пчелиной семьи. Энтеробактерии обнаружены в составе микробоценозов пчел разными авторами [2, 3]. Однако до сих пор вопрос о нормальной микрофлоре пчел остается открытым, несмотря на широкий спектр микроорганизмов, обнаруженных в пчелиных семьях. Цель работы — сравнить спектр энтеробактерии в составе микрофлоры пищеварительной системы здоровых и больных пчел во время зимовки.
Пробы пчел отбирали на пасеке в поселке Доскино (Нижний Новгород, Автозаводский р-н) от одной условно-здоровой и одной условно-больной семьи (в дальнейшем — здоровой и больной) в период с ноября 2011 г. по февраль 2012 г. два раза в месяц.
Здоровые семьи хорошо развивались в течение лета 2011 г. За летний сезон из шестирамочных отводков они доросли до полного гнезда, нормально забирали сахарный сироп во время осенней подкормки. В зиму пошли на 8-9 рамках.
Больные семьи поступили в поселок Доскино в октябре 2011 г. из деревни Калинино Кстовского района. Семьи плохо развивались в течение весенне-летнего периода 2011 г. В июне были обнаружены признаки мешотчатого расплода. Пчелы не собрали мед в течение сезона и ушли в зиму на семи рамках. В январе 2012 г. были выставлены из зимовника в теплицы.
Непосредственно перед бактериологическим анализом насекомых усыпляли хлороформом, обрабатывали в 70%-ном этаноле для освобождения от микроорганизмов, обитающих на внешних покровах, промывали в стерильном физиологическом растворе, затем отделяли брюшко. Брюшки пяти пчел растирали в ступке с 2 мл стерильного физиологического раствора.
Из исходных суспензий готовили десятикратные разведения до 10-6 включительно и засевали на дифференциально-диагностические среды Эндо, Олькеницкого и Chromocult («Merck», Германия). Посевы инкубировали при 37°С в течение 24 ч. Идентификацию микроорганизмов проводили с использованием пластин биохимически дифференцирующих энтеробактерии (ПБДЭ, «Диагностические системы», Нижний Новгород), систем индикаторных бумажных (СИБ, «Микроген», Нижний Новгород). Видовую принадлежность устанавливали в соответствии со схемами и таблицами, представленными в определителе бактерий Берджи [1].
Сравнение энтерофлоры кишечника здоровых и больных пчел показало, что в составе микрофлоры здоровых пчел преимущественно обнаруживались представители рода Klebsiella, лишь в двух пробах здоровых пчел наряду с клебсиеллами были выделены бактерии рода Citrobacter (табл. 1).
1. Энтеробактерии в микрофлоре здоровых и больных пчел
Таким образом, выявлено, что у здоровых пчел в микрофлоре доминируют бактерии Klebsiella oxytoca, что может свидетельствовать об их физиологической роли в организме насекомых. Ранее мы установили, что в составе микрофлоры пищеварительной системы зимующих пчел клебсиеллы занимают лидирующее положение как по числу клеток на единицу объема содержимого кишечника, так и по числу проб, в которых они были обнаружены [4, 5]. Превалирование клебсиелл в содержимом кишечника не исключает присутствия в пчелиной семье особей массивно обсемененных другими энтеробактериями, в частности бактериями рода Citrobacter.
Штаммы Klebsiella oxytoca у здоровых пчел обладают широким спектром ферментативных возможностей, что может обеспечивать переваривание и доступность усвоения углеводов в пищеварительной системе насекомых (табл. 2).
2. Биохимическая характеристика энтеробактерии, наиболее часто выделяемых от пчел
Из пищеварительной системы больных пчел представители рода Morganella выделялись на протяжении всего периода исследования. После постановки улья в теплицу в микрофлоре кроме морганелл обнаружены бактерии родов Klebsiella и Enterobacter, что косвенно может свидетельствовать о контаминации пчел во время посещения медоносных растений. Известно, что микрофлора медоносных растений может содержать представителей семейства Enterobacteriaceae.
В зимний период в составе микробоценоза кишечника здоровых пчел морганеллы обнаруживаются редко [3], а в наших предыдущих исследованиях эти микроорганизмы вообще не обнаруживались [4, 5].
Зимой в кишечнике пчел накапливаются продукты метаболизма, в том числе мочевая кислота и мочевина. Бактерии родов Klebsiella и Morganella отличаются способностью утилизировать мочевину, что, возможно, защищает пчел от интоксикации и способствует поддержанию оптимального рН кишечника.
Таким образом, обнаружение штаммов Klebsiella oxytoca у здоровых пчел в период зимовки позволяет предположить их важную физиологическую роль, в частности: участие клебсиелл в утилизации субстратов корма (сахарозы) и формирование депо связанного азота в организме насекомого. Показано, что энтеробактерии в микробоценозе больных пчел представлены микроорганизмами рода Morganella, а в составе микрофлоры пищеварительной системы здоровых пчел доминируют микроорганизмы рода Klebsiella.
У.Е.ЧЕЧЁТКИНА, А.И.РЕЧКИН,
А.А.РАДАЕВ, В.Н.КРЫЛОВ
Нижегородский госуниверситет им. Н.И.Лобачевского
ж-л «Пчеловодство» №8, 2012 г.Литература
1. Определитель бактерий Берджи / под ред. Дж. Хоулта и др. — М: Мир, 1997. — Т. 1.
2. Евтеева Н.И., Речкин А.И. Поиск новых резервуаров для персистенции и участников циркуляции энтеробактерии в естественных экосистемах // Вестник Нижегородского госуниверситета им. Н.И. Лобачевского. — 2007. — № 6.
3. Ляпунов ЯЗ., Кузяев Р.З., Хисматуллин Р.Г., Безгодова О.А. Энтеробактерии кишечника зимующих пчел Apis mellifera mellifera L. // Микробиология. — 2008. — № 3. — Т. 77.
4. Чечёткина У.Е., Евтеева Н.И., Речкин А.И. Сравнение пейзажа энтеробактерии медоносных пчел Apis mellifera mellifera L. в период зимовки и активного медосбора // Вестник Нижегородского госуниверситета им. Н.ИЛобачевского. — 2010. — №2. — Ч. 2.
5. Чечёткина У.Е., Евтеева НИ., Речкин А.И., Радаев А.А. Энтеробактерии в составе микрофлоры пищеварительной системы медоносных пчел в различные сезоны года // Вестник Нижегородского госуниверситета им. Н.И.Лобачевского. — 2011. — №2. — Ч. 2 (2).
Общайтесь со мной:
