О пасеке

Пчеловодство, разведение и содержание пчел. Пчелы и здоровье. Огород, сад, дача.

Фев, 2019
17

Действия пчелиного яда

Опубликовал: Petr_MS

Механизм анальгетического действия пчелиного яда

В процессе эволюции пчелиный яд превратился в естественный и специальный раздражитель, мобилизующий защитные реакции, выработанные организмом для борьбы с повреждающими факторами внешней среды. Эти реакции протекают на разных уровнях организма и затрагивают изменение активности ряда органов, а также нервной, гуморальной и иммунной систем. При этом боль служит наиболее важным звеном, запускающим цепь адаптивных реакций организма к изменяющимся условиям среды.

В предыдущих исследованиях было продемонстрировано, что пчелиный яд способен оказывать антиноцицептивное (противоболевое) действие при однократном введении [8, 11, 13]. Для нас представлял интерес вопрос, связанный с механизмом анальгетического действия пчелиного яда на сегментарном (спинальном) и супра-сегментарном (супраспинальном) уровне.

Работу выполняли на 90 белых беспородных крысах-самцах массой 200-210 г. До эксперимента их содержали в виварии на стандартной диете. В опыте применяли пчелиный яд, полученный сотрудниками кафедры физиологии и анатомии на пасеках Ставропольского края. Для выяснения механизмов анальгетического действия пчелиного яда животным внутрибрюшинно однократно вводили следующие препараты: гепарин, образующий с пчелиным ядом комплексное соединение [12]; протамина сульфат — классический блокатор эндогенного гепарина [4, 9]; налоксон — антагонист опиатных рецепторов .[3, 10]; обзидан — неизбирательный р-адреноблокатор [5].

Болевые (ноцицептивные) реакции оценивали по стандартным тестам, позволяющим до определенной степени судить о характере влияния веществ преимущественно на спинальном (тест отведения хвоста — tail flick) и супраспинальном (тест горячей пластины — hot plate) уровне. При этом животные проходили фоновое тестирование, исходные ноцицептивные пороги (фон) которых в первом тесте не превышали 8 с, во втором — 15 с [7].

Тест отведения хвоста основан на рефлекторной реакции в ответ на нанесение термического болевого стимула в область верхней трети хвоста. Температуру в фокусе пучка устанавливали на значениях, вызывающих у контрольных животных четкую аверсивную реакцию отведения хвоста с латентным периодом 5-8 с. Латентный период реакции отведения хвоста (ЛП РОХ) определяли по секундомеру.

При использовании теста горячей пластины животное помещали на пластину, нагретую до 57...58°С (температуру ее поверхности регулировали термостатом). Время от момента помещения животного на пластину до первого облизывания задних лап засекали по секундомеру. Это и составляло латентный период реакции облизывания лап (ЛП РОЛ). Максимальная продолжительность нахождения животного на пластине — 25 с.

Достоверность различий между группами оценивали непосредственно по значениям варианта с использованием непараметрического критерия Уилкоксона—Манна—Уитни для независимых совокупностей. Для множественных сравнений применяли критерий Данна [2].

Внутрибрюшинное введение пчелиного яда в дозе 1 мг/кг сопровождалось увеличением длительности ЛП РОЛ и ЛП РОХ, причем величина первого была значительно выше второго (табл).

Предварительное введение гепарина (500 МЕ/кг) повышало анальгетическую активность пчелиного яда как на спинальном, так и на супраспинальном уровне. В этом случае продолжительность ЛП РОХ на 60-й минуте после применения препарата возрастала почти в 3 раза, а ЛП РОЛ — примерно в 2 раза относительно контроля, где пчелиный яд и прочие препараты не использовали.

Иная картина наблюдалась при инъекции инкубируемой in vitro смеси пчелиного яда с гепарином (1 : 0,5). Снижение анальгетической активности зафиксирована во временном интервале от 20 до 90 мин. Спустя 120 и 150 мин ЛП РОХ и ЛП РОЛ увеличились, что свидетельствует о возрастании анальгетической эффективности пчелиного яда. Этот эффект, на наш взгляд, связан с тем, что гепарин образует комплексное соединение, которое в значительной степени снижает анальгезию, а через 120 мин комплекс, видимо, распадается, что и сопровождается увеличением продолжительности латеральных периодов.

Протамина сульфат, блокируя эндогенный гепарин, уменьшал анальгетическую активность пчелиного яда как на спинальном, так и на супраспинальном уровне. Эксперимент наглядно показал, что эндогенный гепарин также влияет на уровень анальгезии.

Налоксон как антагонист опиатных рецепторов при предварительном введении в дозе 1 мг/кг снижал анальгезию, индуцируемую пчелиным ядом. Последний, используемый на фоне действия обзидана, не показывал анальгетическую активность, а ЛП РОЛ достоверно не отличался от контрольных показателей.

Влияние пчелиного яда и других препаратов на ЛП РОЛ и ЛП РОХ у крыс, %

Условия опыта

Время после введения веществ, мин

20

40

60

90

120

150

Контроль (ЛП РОХ-ЛП РОЛ) 100 100 100 100 100 100
Пчелиный яд (1 мг/кг):
ЛП Р0Х 132* 156* 184* 161* 144* 108
ЛП Р0Л 152,1* 115,6 93,4 240,2* 206,3 203,8*
Гепарин (500 МЕ/кг) —► яд:
ЛП РОХ 110 171* 288*+ 196*+ 159* 134*+
ЛП РОЛ 135,0* 97,5+ 175* 309*+ 212*+ 211,3*+
Пчелиный яд+гепарин (1: 0,5):
ЛП РОХ 86*+ 105+ 67*+ 112+ 194*+ 182*+
ЛП РОЛ 66,7*+ 113,1+ 86,8 91,8+ 188,4* 144,6*+
Протамина сульфат (10 мг/кг) —►
яд: ЛП РОХ 79*+ 96+ 71*+ 76*+ 72*+ 65*+
ЛП РОЛ 96,6+ 100,8 62*+ 74,2*+ 73,7** 70,4*+
Налоксон (1 мг/кг) —► яд
(ЛП РОЛ) 53,7*+ 64,3*+ 83,5 88,9+ 97,1+ 97,8+
Обзидан (1 мг/кг) —► яд
(ЛП РОЛ) 98,3+ 87,3+ 84,3 86,9+ 106,9+ 98,9+
Примечание. Различия статистически значимы: * — по сравнению с контролем (р<0,05); + — по с равнению с пчелиным ядом (р<0,05).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что пчелиный яд при парентеральном введении крысам оказывает выраженное антиноцицептивное действие, проявляющееся в тестах отведения хвоста и горячей пластины. Это указывает на то, что антиноцицептивное действие яда реализуется как на сегментарном, так и на супрасегментарном уровне.

Известно, что менее сложная реакция отведения хвоста преимущественно реализуется спинальными антиноцицептивными механизмами. В регуляции более сложной реакции облизывания лап, являющейся интегральным выражением аверсивно-мотивационных процессов в центральной нервной системе, участвуют антиноцицептивные механизмы супра-сегментарных структур [1].

Анализ действия апитоксина показал, что антиноцицептивный эффект при болюсном введении относительно непродолжителен (до 1,5 ч) и носит фазный характер. Двухфазность антиноцицептивного эффекта определяется, по всей видимости, активацией различных нейрохимических систем под действием пчелиного яда. При этом вклад каждой системы в развитие анальгезии различен на разных этапах эксперимента.

В реализации антиноцицептивного действия пчелиного яда участвует эндогенная опиоидная система. В результате наших исследований выяснилось, что у крыс антагонист опиатных рецепторов — налоксон реверсировал антиноцицептивный эффект пчелиного яда. Под активацией эндогенной опиоидной системы в первую очередь понимают увеличение синтеза, прицельного протеолиза и высвобождения (то есть ускорение процессинга) эндогенных опиоидных пептидов — эндорфинов, энкефалинов и др. В этом отношении характер изменений эндогенной опиоидной системы при действии пчелиного яда выглядит достаточно однотипным: при введении апитоксина зарегистрировано увеличение эндорфино-(энкефалино-)-подобной иммунореактивности в плазме крови (в ряде случаев и в ткани мозга) животных [6].

Анальгезия, вызываемая пчелиным ядом, может являться следствием как развития общей стресс-реакции, так и специфической активации эндогенных антиноцицептивных систем. Активация эндогенной опиоидной системы при введении пчелиного яда, по-видимому, носит неспецифический характер и представляет собой генерализованную ответную реакцию организма на ксенобиотики.

Потенцирование анальгетической активности пчелиного яда на фоне действия гепарина, возможно, связано с тем, что последний увеличивает чувствительность опиатных рецепторов к апитоксину, а использование гепарина в смеси с ядом на начальном этапе не приводит к увеличению ЛП РОЛ и ЛП РОХ. Через определенное время комплекс яд + гепарин распадается и анальгетические свойства яда проявляются в полной мере.

Итак, опытами на крысах доказано, что пчелиный яд обладает анальгетическими свойствами на спинальном и супраспинальном уровне, увеличивая ЛП РОХ и ЛП РОЛ животных. Гепарин потенцирует анальгетическую активность пчелиного яда, а протамина сульфат сдерживает. Налоксон снижает продолжительность ЛП РОЛ при индуцировании пчелиным ядом. На фоне действия обзидана пчелиный яд не проявлял анальгетическую активность, а ЛП РОЛ достоверно не отличался от контрольных показателей.

З.В.БОБРОВА, А.Е.ХОМУТОВ
Нижегородский государственный университет
им. Н.И.Лобачевского
ж-л «Пчеловодство» №2, 2019 г.

Литература

1. Брагин Е.О. Нейрохимические механизмы регуляции болевой чувствительности. — М., 1991.

2. Гланц С. Медико-биологическая статистика. — М., 1999.

3. Добрякова Ю.В., Дубинин В.А., Ивлееа Ю.А. u др. Влияние опиоидного антагониста налоксона на материнскую мотивацию белых крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2005. — Т. 140. — № 7.

4. Ефимов B.C., Румянцева А.Г. Нежелательные эффекты длительного применения гепарина и подходы к его устранению // Экспериментальная и клиническая фармакология. — 1992. — Т. 55. — № 6.

5. Машковский М.Д. Лекарственные средства. — М., 2002.

6. Парин С.Б., Зимин Ю.В., Крылов В.Н. Применение пептидов опиоидного ряда в экспериментальной терапии шока // Антигипоксанты и антипротекторы. — СПб., 1994. — Вып. 4.

7. Перфилов Д.В., Баранов М.В., Черногоров Р.В. Способы оценки ноцицептивной чувствительности в экспериментальных исследованиях и клинике // Успехи физиологических наук. — 2007. — Т. 38. — № 2.

8. Пурсанов К.А., Перепелюк З.В. Сравнительная характеристика антиноцицептивного действия пчелиного яда у мышей и крыс на супраспинальном уровне // материалы III Евразийского симпозиума по перепончатокрылым стран СНГ. — Н. Новгород, 2015.

9. Рыбин В.К, Григорова А.В., Матросович Т.Ю., Макаров И.В. Оценка антигепариновой активности препаратов протамина // Химико-фармацевтический журнал. — 1992. — Вып. 26. — № 1.

10. Судаков С.К., Русакова И.В., Тригуб М.М., Помыткин И.А. Метилналоксон подавляет синдром отмены у морфинзависимых крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2007. — Т. 143. — № 5.

11. Хомутов А.Е., Некрасова М.М. Влияние гепарина на антиноцицептивные свойства пчелиного яда // Новое в науке и практике пчеловодства: материалы координационного совещания и конференции. — М., 2003.

12. Хомутов А.Е., Орлов А.В., Мухина И.В., Козин Д.В. Антитоксические свойства гепарина // материалы Все-рос. конф. «Перспективы развития Волжского региона».— Тверь, 1999.

13. Шилова О.П., Парин С.Б. Сравнительный анализ антиноцицептивного действия некоторых зоотоксинов // Вестник ННГУ им. Н.И.Лобаческого. — 1995. — № 4.

Понравилась статья? Расскажите друзьям:

Общайтесь со мной:

Google Bookmarks Digg Reddit del.icio.us Ma.gnolia Technorati Slashdot Yahoo My Web News2.ru БобрДобр.ru RUmarkz Ваау! Memori.ru rucity.com МоёМесто.ru Mister Wong

Хотите получать новые статьи на почту? Введите свой Email

 

 

«С этой статьей также смотрят:»

Ваш отзыв


    Обо мне

    E-mail: petr9921()yandex.ru

    Skype: Petr_MS